Agilent1100液相基本操作步驟

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2008-7-8 15:19 上傳

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Agilent1100液相基本操作步驟
(一)、開(kāi)機(jī)：
    1、打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT （或Windows 2000）畫(huà)面,并運(yùn)行Bootp Server程序。
     2、打開(kāi) 1100 LC 各模塊電源。
     3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1100LC通訊，進(jìn)入的工作站畫(huà)面。
    4、從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫(huà)面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。
   5、把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。
   6、打開(kāi)Purge閥。
   7、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。
   8 、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。
   9、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump control選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開(kāi)始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。
   10、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump Control選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵， 關(guān)閉Purge  valve。
   11、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫(huà)面，設(shè)Flow：1.0ml/min。
   12、單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。單擊Ok。

（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯：
    1、開(kāi)始編輯完整方法：
     ●從“Method”菜單中選擇“Edit entire method” 項(xiàng)，如上圖所示選中除“Data analysis ”外的三項(xiàng)，單擊Ok，進(jìn)入下一畫(huà)面。
    2、方法信息：
     ●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
     ●單擊Ok 進(jìn)入下一畫(huà)面。
    3、泵參數(shù)設(shè)定：（以二元泵為例）
      ●在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“Solvent B”處輸入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,編輯梯度。在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。
     ●  單擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。
    4、自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:
     ●選擇合適的進(jìn)樣方式, 進(jìn)樣體積 1.0ul ,洗瓶位置為6號(hào)。“Standard Injection”----只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無(wú)洗針功能。“Injection with Needle Wash”----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針。“Use injector program”---可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。
     ●點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。
    5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定:
      ●在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more>>” 鍵,如圖所示,選中”Same as left”---使柱溫箱的溫度左右一致。
       ●點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫(huà)面。
     6、VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:
       ●在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),如254nm,  在”Peak width (Response time)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如>0.1min  (2s)。

       ●在Timetable 中可以“Insert”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)，如1min  ，波長(zhǎng)=300nm。點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫(huà)面。
     7、DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:
       ●檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm,BW=30nm,     參比波長(zhǎng)=350nm,BW=100nm;  
       ●檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬BW： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬BW：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。Peak width（Response time）：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。Slit—狹縫窄，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。
       ●點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫(huà)面。
     8、RID檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:
       ●色譜條件:   

進(jìn)樣體積: 20ul 。
光學(xué)單元溫度:  Off 。


極性: 正 。
峰寬(響應(yīng)時(shí)間) :  4s  。
       ●“Optical Unit Temperature”---若環(huán)境溫度控制在±2℃,設(shè)定為Off,  若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀。“Peak width”---大多數(shù)分析設(shè)為4S，只有在高速分析下設(shè)為更短。“Automatic recycling after analysis”---在不進(jìn)行分析時(shí)可以讓流動(dòng)相循環(huán)，節(jié)省流動(dòng)相，檢測(cè)器連續(xù)運(yùn)行，可隨時(shí)投入使用。
       ●點(diǎn)擊RID圖標(biāo)，選擇RID  Control ：Heater 設(shè)為On，若要循環(huán)流動(dòng)相，必須將“Recycling Valve”設(shè)為ON。手動(dòng)purge 參比池，將其設(shè)為On，并輸入Purge 時(shí)間。

      9、FLD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:

色譜條件：

        ●   樣品：P/N 01018-68704  用甲醇稀釋為1:10。
        ●    進(jìn)樣體積：5ul。
        ●    柱溫箱:  30℃ 。   EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。
        ●    響應(yīng)時(shí)間=4s.     停止時(shí)間： 出峰完畢。
        ●    Excitation A: 激發(fā)波長(zhǎng):200-700nm,步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。
        ●    Emission:  發(fā)射波長(zhǎng): 280-900nm, 步長(zhǎng)為1nm,或Zero Order。

        ●    PMT: 大多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為10,若高濃度樣品峰被切平頭,則減少 PMT 值。
        ●  “Peak width”：大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值。
        ●    Multi Ex ： 多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)）。
        ●    Multi Em：多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射）。

        ●    同時(shí)可以輸入范圍Range、步長(zhǎng)step、采集光譜。
      10、在“ Run time checklist ”中選中“Data acquisition”，單擊Ok。
      11、單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名，如“test”，單擊Ok。
      12、從菜單 “View”中選中”O(jiān)nline signal” ,選中Windows 1,然后單擊Change 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊Ok.(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)12,選中Windows 2)。
      13、從“Run  control ”菜單中選擇“Sample info”選項(xiàng)，如上圖所示，輸入操作者名稱，在“Data file ”中選擇“Manual”或“Prefix”。

      區(qū)別: Manual--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋。Prefix—在Prefix 框中輸入前綴，在Counter 框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd0001，vwd0002……。
     14、從Instrument 菜單選擇System on。
     15、等儀器Ready，基線平穩(wěn)，從Method菜單中選擇“Run method”，進(jìn)樣。

（三）、數(shù)據(jù)分析方法編輯:
    1、從“View”菜單中，單擊“Data analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫(huà)面。
    2、從“File”菜單選擇“Load signal”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。單擊Ok。
    3、做譜圖優(yōu)化,從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)，。從Ranges中選擇Auto scale及合適的顯示時(shí)間，單擊ok,或選擇”Use Ranges” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。
    4、積分:
      (1)、從“Integration”中選擇 “Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇“Integration  Events”選項(xiàng)，選擇合適的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。
      (2)、從“Integration”菜單中選擇“Integrate”選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。
      (3)、如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。

      (4)、單擊左邊“√”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。
    5、打印報(bào)告:
      (1)、從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng)，進(jìn)入如上畫(huà)面。
      (2)、單擊“Quantitative  Results”框中Calculate右側(cè)的黑三角，選中Percent（面積百分比），其它選項(xiàng)不變。
      (3)、單擊Ok.
      (4)、從“Report”菜單中選擇“Print report”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則單擊Report 底部的“Print”鈕。

(四)、關(guān)機(jī):
      ●  關(guān)機(jī)前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如ACN），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]
      ●  退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）。
      ●  關(guān)掉Agilent 1100電源開(kāi)關(guān)。

[ 本帖最后由 ycjlzxj 于 2008-7-8 20:01 編輯 ]