液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方法

液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方法

HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
1、樣品量不足，解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4、檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。
5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6、檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7、檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。
9、流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。
10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
為什么HPLC柱柱壓過(guò)高
柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。
1、拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；
2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
3、將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；
4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。 一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE提供的Rheodyne 7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的最佳選擇。
液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？
1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
如何解決HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間發(fā)生漂移或急速變化
漂移現(xiàn)象
1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
快速變化現(xiàn)象
1. 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
2、泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
HPLC 儀器問(wèn)題
1、 我的HPLC泵壓明顯的偏高，請(qǐng)問(wèn)可能的原因？
答：流速設(shè)定過(guò)高；流動(dòng)相或進(jìn)樣中有機(jī)械雜質(zhì)，造成保護(hù)柱、柱前篩板或在線過(guò)濾器阻塞；流動(dòng)相粘度過(guò)大；柱溫過(guò)低；緩沖鹽結(jié)晶；壓力傳感器故障。
2、 基線不穩(wěn)，上下波動(dòng)或漂移的原因是什么，如何解決？
答：a.流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣
　　b.單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物
　　c.泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)；更換泵密封
　　d.系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)；確定漏液位置并維修
　　f.柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負(fù)壓調(diào)整器
　　g.檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處
　　h.柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)；用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。
3、 接頭處為何經(jīng)常漏液，如何處理？
答：接頭沒(méi)有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手?jǐn)Q緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會(huì)留下死體積。接頭被污染或磨損；建議更換接頭。接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。
4、 進(jìn)樣閥漏液是如何造成的？
答：a.轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封
　　b.定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán)
　　c.進(jìn)樣口密封松動(dòng)；調(diào)整松緊度
　　d.進(jìn)樣針頭尺寸不合適，一般是過(guò)短；使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針（注意針頭形狀）
　　e.廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管 譜圖問(wèn)題
1、 問(wèn)：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？
答：a.篩板阻塞；反沖色譜柱、更換進(jìn)口篩板
　　b.色譜柱塌陷；填充色譜柱
　　c.有干擾物質(zhì)的存在；使用更長(zhǎng)的色譜柱、改變流動(dòng)相或更換色譜柱
　　e.流動(dòng)相PH值不合適；調(diào)整PH值，對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰
　　f.樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)；加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑或更改色譜柱
2、 問(wèn)：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？
答：保護(hù)柱或分析柱污染；取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧Ｈ绻麊?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。樣品溶劑不溶于流動(dòng)相；改變樣品溶劑，如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。
3、 問(wèn)：K值增加時(shí)，拖尾更嚴(yán)重，這是為什么？
答：反相模式，二級(jí)保留效應(yīng)；
　　a.加入三乙胺（或堿性樣品）
　　b.加入乙酸（或酸性樣品）
　　c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）
　　d.更換一支柱子
4、 問(wèn)：保留時(shí)間的波動(dòng)有幾種可能的原因？
答：溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。流動(dòng)相組分變化；防止流動(dòng)相蒸發(fā)、反應(yīng)等，做梯度時(shí)尤其要注意流動(dòng)相混合的均勻。色譜柱沒(méi)有平衡；在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。
液相色譜常用符號(hào)與術(shù)語(yǔ)表
ACN 乙腈 Acetonitrile
AUFS 滿量程的吸光度單位 Absorbance units, full scale
As 峰不對(duì)稱因子
B 二元流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇
BSA 牛血清白蛋白（一種蛋白質(zhì)） Bovine serum albumin
CAF 咖啡因（中性溶質(zhì)） Caffeine
CRF 色譜響應(yīng)因子 Chromatographic response function；色譜圖總分離度的定量指標(biāo)
dc 色譜柱內(nèi)徑（cm）
DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine
DNB 2,4-二硝基甲酰（基） 2，4-Dinitrobenzoyl
dp 色譜柱填料的粒度（cm）
DRYLAB 液相資源公司（LC Resources INC.)的計(jì)算機(jī)模擬軟件。DRYLAB I用于等度預(yù)測(cè)，DRYLAB G用于梯度預(yù)測(cè)
F 流動(dòng)相的流速（ml/min）
FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷
GPC 凝膠滲透色譜法 Gel-permeation chromatography
HA 酸性溶質(zhì)，能電離出A-
Hex 己烷 Hexane
hr 二相鄰譜帶之間的谷高
HVA 高香草酸 Homovanillic acid
h’ 峰高
h1,h2 相鄰譜峰1和譜峰2的峰高
IEC 離子交換色譜法 Ion-exchange chromatography
IP 離子對(duì) Ion-pair
IPC 離子對(duì)色譜法 Ion-pair chromatography
J 色譜峰強(qiáng)度參數(shù)
K’ 所給譜峰的容量因子，k’=(tR-t0)/t0=tR’/t0，tR=t0(1+k’)
k 梯度洗脫過(guò)程中，某溶質(zhì)的k’的平均值或有效值
kw 以水做流動(dòng)相k’的外推值
k1,k2 相鄰譜峰1和譜峰2的容量因子
L 色譜柱長(zhǎng)度（cm）
Lc 檢測(cè)器流動(dòng)池光路的長(zhǎng)度（cm）
M 溶質(zhì)的分子量
MC 二氯甲烷 Methylene chloride
MDST 混合設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)技術(shù) Mixture-design statistical technique；一種優(yōu)化流動(dòng)相的軟件
MeOH 甲醇 Methanol
MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether
MW 溶質(zhì)的分子量
N 色譜柱塔板數(shù)
NAPA N-乙酰普魯卡因胺 N-Acetylprocainamide（堿性溶質(zhì)）
N0 檢測(cè)器的基線噪音
ODS 十八烷基硅烷 Octadecylsilyl
P 色譜柱的壓力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱極性參數(shù)
PA 普魯卡因胺 Procainamide（堿性物質(zhì)）
PAH 聚芳香烴 Polyaromatic Hydrocarbon
PESOS 優(yōu)化流動(dòng)相的計(jì)算機(jī)軟件（美國(guó)Perkin-Elmer產(chǎn)品）
pKa 溶質(zhì)酸性常數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)；當(dāng)pH=pKa時(shí)，溶質(zhì)中有一半是電離的
Rk 保留值范圍，Rk=（最末譜峰k’）/（最初譜峰k’）
RRM 相對(duì)分離度圖（通常N=10000）
Rs 相鄰二譜峰的分離度
S 當(dāng)流動(dòng)相中的%B改變時(shí)，測(cè)量溶質(zhì)保留值的變化速率的參數(shù)
SAL 水楊酸 Salicylic Acid
SEC 尺寸排阻色譜法 Size-exclusion chromatography
S/N 信噪比 Signal to noise ratio
t 分離時(shí)間（min）（樣品進(jìn)樣時(shí)t=0）
tp 梯度系統(tǒng)的滯后時(shí)間（min）
TBA 四丁基銨離子 Tetrabutylammonium ion
TEA 三乙胺 Triethylamine
THF 四氫呋喃 Tetrahydrofuran
tk 在用于校正等度洗脫溶劑強(qiáng)度的流動(dòng)相離開梯度混合器時(shí)，梯度洗脫的時(shí)間
TLC 薄層色譜法 Thin-layer chromatography
TMA 四甲基銨 Tetramethylammonium（鹽）
TMS 三甲基硅烷 Trimethylsilyl
t0 色譜柱的死時(shí)間（min）
tR 溶質(zhì)的保留時(shí)間（min）
tG 梯度時(shí)間（min），即梯度開始至結(jié)束的時(shí)間
t1,t2 相鄰譜峰1和譜峰2的保留時(shí)間（min）
ti 色譜圖中第一峰的保留時(shí)間（min）
tf 色譜圖中最末峰的保留時(shí)間（min）
△tg tf-ti
tx (tf-ti)/2
UV 紫外光 Vm 色譜柱的死體積（mL），Vm=t0F
VMA 香草扁桃酸 Vanillymandelic acid
wm 化合物的進(jìn)樣量
w1,w2 相鄰譜峰1和譜峰2于半峰高處（W1/2）的寬度（min）
W1,W2 相鄰譜峰1和譜峰2的基線寬度（min）
W1/2 半峰高處的譜帶寬度
xd,xe,xn 溶劑選擇參數(shù)，分別用于測(cè)定溶劑的酸度、堿度和偶極性的程度
? 分離因子，?=k2/k1
△? 梯度洗脫期間流動(dòng)相成分的變化
?o 溶劑強(qiáng)度參數(shù)
? 化合物的克分子吸收系數(shù)
? 流動(dòng)相的粘度（Pa?s)
? 流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積份數(shù)
%B 二元流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積百分比（%v）
液相色譜法簡(jiǎn)介
氣相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結(jié)果，而必須由已知標(biāo)準(zhǔn)作對(duì)照定性。當(dāng)無(wú)純物質(zhì)對(duì)照時(shí)，定性鑒定就很困難，這時(shí)需借助質(zhì)譜、紅外和化學(xué)法等配合。另外大多數(shù)金屬鹽類和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)還不能分析。此缺點(diǎn)可高效液相色譜法來(lái)克服。在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論與技術(shù)，在70年代初建立了高效液相色譜分析法（以HPLC表示）。在常壓下操作的液相色譜，分離一個(gè)樣品往往長(zhǎng)達(dá)幾小時(shí)至幾十小時(shí)，因此工作效率很低。人們?cè)鴮?duì)這種經(jīng)典液相色譜法試用了柱前加壓或柱后減壓的辦法來(lái)提高流速，以縮短分離時(shí)間，但是結(jié)果失敗了。根據(jù)液相色譜理論，因?yàn)殡S著載液（流動(dòng)相）流速的提高，板高則增大，所以柱效會(huì)顯著降低。隨著生產(chǎn)技術(shù)的提高，人們制成了細(xì)?。?lt;10?m）而高效的填充物，從而使柱效大大提高。但是隨著填充物粒度的減小，柱壓降顯著增大，為了得到合理的載液流速，使用了高壓；輸液泵，使流速達(dá)到1~10mL/min。從而使分析一個(gè)多組分樣品只需幾分鐘到幾十分鐘時(shí)間。隨著高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測(cè)器以及電子技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)的應(yīng)用，70年代以業(yè)逐步實(shí)現(xiàn)了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動(dòng)化操作。因此人們常稱它為高效液相色譜或現(xiàn)代液相色譜，以區(qū)別于經(jīng)典液相色譜。高效液相色譜法的分類與經(jīng)典液相色譜法一致。按固定相的聚集狀態(tài)不同分為液固色譜法和液液色譜法。按分離原理不同分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜法四類。
高效液相色譜所用基本概念：
保留值等色譜分析有關(guān)術(shù)語(yǔ)，以及分配系數(shù)、分配比、塔板高度、分離度、選擇性等方面均與氣相色譜相一致；高效液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率理論也與氣相色譜一致。因液相色譜以液體代替氣相色譜中的氣體作流動(dòng)相，則速率議程H=A+B/?+C?。式中：縱向擴(kuò)散項(xiàng)（分子擴(kuò)散項(xiàng)）B/?對(duì)板高的影響與氣相色譜不同，由于液相色譜中組分分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm僅為氣相色譜中的萬(wàn)分之一，因此縱向擴(kuò)散項(xiàng)對(duì)板高的影響可以忽略不計(jì)。于是影響液相色譜的主要因素是傳質(zhì)項(xiàng)Cu。由圖14—可知，氣相色譜（GC）的流動(dòng)相流速u增大時(shí)，板高H顯著增大（即柱效顯著降低），而液相色譜（LC）的流速增大時(shí)，板高增大不顯著（即柱效降低不顯著）。這說(shuō)明高效液相色譜也有很高的分離效能，此外，氣相色譜的載氣權(quán)數(shù)種，其性質(zhì)差別也不大，對(duì)分離效果影響也不大。而液相色譜的載液種類多，性質(zhì)差別也大，對(duì)分離效果影響顯著。因此流動(dòng)相的選擇很重要，并且在選擇流動(dòng)相對(duì)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：流動(dòng)相對(duì)樣品有適當(dāng)?shù)娜芙舛?，但不與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，也不與固定液互溶；流動(dòng)相的純度要高（至少分析純）、粘度要小，以免帶進(jìn)雜質(zhì)和組分在流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)下降；流動(dòng)相應(yīng)與所用檢測(cè)器相匹配，不應(yīng)對(duì)組分檢測(cè)產(chǎn)生干擾作用。高效液相色譜不但具有高效、高速、高靈敏度的特點(diǎn)，還由于它的流動(dòng)相（載液）種類比氣相色譜的流動(dòng)相（載氣）多，因此可選用兩種或多種不同比例的液體作流動(dòng)相，從機(jī)時(shí)可提高選擇性。此外，液相色譜的餾分比氣相色譜易于收集。便于為紅外、核磁等方法確定化合物結(jié)構(gòu)提供純樣品。由于高效液相色譜法具有以上特點(diǎn)，它適于分離、分析沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、分子量大（大于400）的氣相色譜法不能或不易分析的許多有機(jī)物和一些無(wú)機(jī)物，而這些物質(zhì)占化合物總數(shù)的75~80%。因此它已廣泛用于核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、糖類、脂類、甾類化合物、激素、生物堿、稠環(huán)芳烴、高聚物、金屬螯合物、金屬有機(jī)化合物以及多種無(wú)機(jī)鹽類的分離和分析。但是，高效液相色譜的固定相的分離效率、檢測(cè)器的檢測(cè)范圍以及靈敏度等方面，目前還不如氣相色譜法。此外對(duì)于氣體和易揮發(fā)物質(zhì)的分析方面也遠(yuǎn)不如氣相色譜法，因此高效液相色譜法和氣相色譜法配合使用可互相取長(zhǎng)補(bǔ)短，相輔相成。1.分離原理
凝膠色譜，又稱空間排阻色譜。它是利用某些凝膠對(duì)混合物各組分因分子量不同，其阻滯作用也不同而進(jìn)行分離、分析的方法。凝膠色譜的分離要理和其它色譜法不同，它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑要比分子篩大得多，一般為幾百至幾千埃。色譜柱內(nèi)填充具有一定大小孔穴的凝膠。當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，不同大小的樣品分子（圖14—2中以黑點(diǎn)表示）隨流動(dòng)相沿凝膠顆粒（圖14—2中以空心圈表示）外部間隙和凝膠孔穴旁流過(guò)，體積在的分子因不能滲透到凝膠孔穴里而得到排阻，因此較為順利地通過(guò)凝膠柱而較早地被流動(dòng)相沖洗出來(lái)。中等體積的分子產(chǎn)生部分滲透作用，小分子可滲透到凝膠孔穴里去而受阻滯，因有一個(gè)平衡過(guò)程而較晚地被流動(dòng)相沖洗出來(lái)。這樣，試樣組分基本上按分子大小受到不同阻滯而先后流出色譜柱，從而實(shí)現(xiàn)分離目的。光凝膠色譜采用水溶液作流動(dòng)相進(jìn)，稱為過(guò)濾凝膠色譜（HFC），而用有機(jī)溶劑為流動(dòng)相時(shí)，稱為凝膠滲透色譜（GPC）。
2．固定相
凝膠色譜的固定相凝膠，是含有大量液體（一般是水）的柔軟而富于彈性的物質(zhì)，是一種經(jīng)過(guò)交聯(lián)而具有立柱網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。根據(jù)凝膠的交聯(lián)程度和含水量的不同，分了軟質(zhì)、半硬質(zhì)和硬質(zhì)三種。軟質(zhì)凝膠（如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠等）交聯(lián)度低，膨脹度大，容量大，可壓宿，不能用于高壓（使用壓力低于3.5kg/㎝2或更低），主要用于含水體系的常壓凝膠色譜，半硬質(zhì)凝膠（如苯乙烯一二乙烯基苯交聯(lián)共聚凝膠），容量中等，滲透性較高，壓力可用到70kg/㎝2。適用于非水溶劑流動(dòng)相；硬質(zhì)凝膠（如多孔硅膠、多也玻球等），膨脹度小，不可壓縮，滲透性好，可耐高壓，適于高流速下操作。
3．流動(dòng)相
在凝膠色譜中，為提高分率效率，多采用低粘度、與樣品折光指數(shù)相差大的流動(dòng)相。常用的流動(dòng)相有苯、甲苯、鄰二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。
高效液相色譜儀操作步驟
高效液相色譜儀操作步驟：
1)、過(guò)濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)、對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)、打開HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4)、進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)、有一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10 ml/min。
6)、調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)、設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。
8)、進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9)、關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
10)、填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
注意事項(xiàng)：
1)、流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。
2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過(guò)柱子。
3)、所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。
4)、壓力不能太大，最好不要超過(guò)2000 psi。