液相色譜儀檢定中的影響因素及解決方法

液相色譜儀檢定中的影響因素及解決方法

液相色譜法簡介
在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論與技術(shù)，在70年代初建立了高效液相色譜分析法（HPLC）。根據(jù)液相色譜理論，隨著載液（流動相）流速的提高，板高則增大，所以柱效會降低。隨著技術(shù)的提高，人們制成了細小（<10μm）而高效的填充物，從而使柱效大大提高。但是隨著填充物粒度的減小，柱壓降顯著增大，為了得到合理的載液流速，使用了高壓輸液泵，使流速達到（1~10）mL/min。從而使分析一個多組分樣品只需幾分鐘到幾十分鐘時間。隨著高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測器以及電子技術(shù)和計算機技術(shù)的應(yīng)用，70年代以來逐步實現(xiàn)了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動化操作。高效液相色譜法適于分離、分析沸點高、熱穩(wěn)定性差、分子量大的許多有機物和一些無機物，而這些物質(zhì)占化合物總數(shù)的（75~80）%，因此它已廣泛應(yīng)用。
本文根據(jù)JJG 705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程，對檢定過程中可能遇到的影響因素進行分析。

液相色譜檢定條件的選擇
進行液相色譜檢定時，按照一定的程序，有目的地選擇分析方法，才可能得到好的分析結(jié)果。
1.柱子的選擇
在液相色譜分析方法中最重要的就是色譜柱的選擇。現(xiàn)在大部分液相色譜分析都是使用反相色譜柱，其中以C18和C8柱最為流行。在大多數(shù)情況下，使用這兩種柱子都能獲得理想的分離效果。柱子性能穩(wěn)定，重現(xiàn)性也好，分離后峰的形狀也不錯。
2.柱子大小的選擇
液相色譜分析時柱子選擇的另一個因素就是柱子大小、填充顆粒的直徑（dp）的選擇。最常用顆粒直徑為5μm。顆粒的dp小意味著可以獲得較高的理論塔板數(shù)，但所需的柱壓增大，而且色譜柱易堵塞。 實驗室中經(jīng)常使用的是（150mm×4.6mm，dp為5μm）和（ 250mm×4.6mm，dp為5μm）的色譜柱。在一般情況下流速可設(shè)定為1ml/min。
3.有機溶劑的選擇
獲得成功分離的另一個重要因素就是流動相有機溶劑的選擇，每一種溶劑都有其獨特的優(yōu)點。考慮到理想溶劑的特點，如粘度低、紫外吸收弱、與樣品不相互作用，而且使用方便，所以甲醇、乙腈作為有機溶劑較為常見。
對于紫外檢測器和二極管檢測器，檢測波長設(shè)定為254nm，利用甲醇作為流動相，在柱壓較低的條件下，流速可控制在（1~2）ml/min之間。
4.其它的因素
還應(yīng)考慮到其它的一些因素，比如溫度。溫度變化１℃，保留時間將變化（1~3）％，溫度的變化還影響色譜柱的選擇性。在分析時柱溫一般比室溫高一點，因為此時溫度易控制，而且在低壓下有利于降低溶劑的粘度，從而降低柱壓。檢定過程中，溫度變化不超過3℃。

受益非淺,在次謝過啦.

好膚淺,在工作中并沒有沒有實質(zhì)用處

請你發(fā)表高深、有幫助的帖子。

很受益呀,雖然很多大家 都明白的,但很少向版主那樣好好總結(jié)

這些都 是常規(guī)的檢定知識，用處不大！！

通常情況下，連接數(shù)據(jù)工作站時，島津的儀器選擇AUX為2，這樣采集的電壓信號1mV才對應(yīng)1mAU。若是輸出模擬信號，還要注意量程范圍range應(yīng)該選擇0.01（儀器的信號輸出設(shè)置為10mV時）這樣信號才是1：1的。依此類推，大家檢定的時候一定要先了解儀器量程和AUX以及輸出端口的mV設(shè)置，必免出現(xiàn)虛假的噪聲過大或者噪聲過小的狀況。Waters和安捷倫的默認設(shè)置就不一樣，W一般設(shè)為2V，A一般設(shè)為0.01V

另外檢定示差折光檢測器時，規(guī)程上要求用C18柱。這時一定要注意必須用水性的C18柱，不能是一般的那種。其實很多用這種檢測器的單位都配有糖柱，糖柱應(yīng)該更合適